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ALTERATA FLUIDITA' DI MEMBRANA IN SALMONELLA: APPROCCIO INNOVATIVO PER LO SVILUPPO DI UNA NUOVA CLASSE DI VACCINI

Abbiamo precedentemente dimostrato in S. Typhimurium che la modifica genetica dello stato fisico della membrana (MPS) altera la risposta heat shock e rende incapace la Salmonella di crescere nei macrofagi in vitro. L'esecuzione di esperimenti in vivo risulta indispensabile per validare le osservazioni in vitro e quindi dimostrare che tali ceppi attenuati, in un modello murino di infezione, non uccidono nè causano malattia nel topo che risulterà protetto quando verrà successivamente inoculato con il ceppo wild-type. La scelta di tale modello è inevitabile per poter valutare la risposta immunitaria dell'ospite e conseguente immunizzazione.Nel primo anno di questo progetto di ricerca, ceppi attenuati di Salmonella, ottenuti nel nostro laboratorio sono stati iniettati a topi C57BL/6, che sono stati sacrificati a differenti tempi dopo l'inoculo. Parallelamente gruppi di topi iniettati con ceppi modificati di Salmonella, sono stati monitorati giornalmente valutandone la sopravvivenza.Milza e fegato sono stati prelevati sterilmente in parte omogenizzati e piastrati ad opportune diluizioni su piastre LB agar per la conta delle colonie dopo un'incubazione O/N a 37oC, e in parte fissati in mezzo OCT e tagliate tramite criostato per analisi immuno-istologiche.Rimane da analizzare l'infiltrazione di cellule del sistema immunitario, quali cellule dendritiche, macrofagi, cellule T e B, attraverso metodi di immuno-istochimica, immuno-fluorescenza o mediante analisi FACS.Negli stessi tessuti e nel siero saranno misurate mediante ELISA anche i livelli di citochine sia pro- che anti-infiammatorie. Inoltre, saranno misurati i livelli di immunoglobuline nel siero degli animali immunizzati.Gruppi di topi immunizzati con ceppi di Salmonella attenuati riceveranno, dopo 40 giorni dall'immunizzazione, Salmonella wt. Tali topi verranno monitorati giornalmente valutandone la sopravvivenza.Lavori selezionati nel triennio 2011-2013:Costi R, Crucitti GC, Pescatori L, et al. New nucleotide-competitive non-nucleoside inhibitors of terminal deoxynucleotidyl transferase: discovery, characterization, and crystal structure in complex with the target. J Med Chem. 2013 Sep 26;56(18):7431-41. doi: 10.1021/jm4010187. IF=5,6Calabrese EC, Castellano S, Santoriello M, Sgherri C, Quartacci MF, Calucci L, Warrilow AG, Lamb DC, Kelly SL, Milite C, Granata I, Sbardella G, Stefancich G, Maresca B, Porta A. Antifungal activity of azole compounds CPA18 and CPA109 against azole-susceptible and -resistant strains of Candida albicans. J Antimicrob Chemother. 2013 May;68(5):1111-9. doi: 10.1093/jac/dks506. IF=5,338La Regina G, Bai R, Rensen WM, et al. Toward highly potent cancer agents by modulating the C-2 group of the arylthioindole class of tubulin polymerization inhibitors. J Med Chem. 2013 Jan 10;56(1):123-49. doi: 10.1021/jm3013097. IF=5,6La Regina G, Bai R, Rensen W, et al. Design and synthesis of 2-heterocyclyl-3-arylthio-1H-indoles as potent tubulin polymerization and cell growth inhibitors with improved metabolic stability. J Med Chem. 2011 Dec 22;54(24):8394-406. doi: 10.1021/jm2012886. IF=5,6Gomez-Monterrey I, Campiglia P, Aquino C, et al. Design, synthesis, and cytotoxic evaluation of acyl derivatives of 3-aminonaphtho[2,3-b]thiophene-4,9-dione, a quinone-based system. J Med Chem. 2011 Jun 23;54(12):4077-91. doi: 10.1021/jm200094h. IF=5,6