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STUDIO SU METABOLITI SECONDARI E POSSIBILE ATTIVITA BIOLOGICA DI SPECIE ITALIANE APPARTENENTI AL GENERE HYPERICUM

ll progetto di ricerca verterà sullo studio di alcune specie italiane del genere Hypericum, con la finalità di contribuire alla conoscenza della chimica e della attività biologiche di questo genere, molto ampio ma non ancora ben conosciuto.Il programma sarà articolato come segue:a)Selezione di piante appartenenti al genere Hypericum tipiche della flora italiana e preparazione degli estratti e/o oli essenziali. Il materiale vegetale verrà raccolto e diviso a seconda degli organi e le diverse parti della pianta verranno estratte in successione, utilizzando solventi a polarità crescente.b) Test in vitro preliminari sugli estrattiGli estratti così ottenuti verranno saggiati, a diverse dosi, con test in vitro, allo scopo di selezionare le specie vegetali che posseggano una maggiore attività biologica.c) Estrazione, isolamento e purificazione dei componenti bioattiviGli estratti attivi saranno sottoposti a procedure cromatografiche per isolare e caratterizzare i metaboliti attivi in essi presenti. Gli estratti metanolici saranno purificati mediante cromatografia su colonna Sephadex LH 20 e analizzati tramite HPLC su colonna C18 a fase inversa. Gli estratti ottenuti per trattamento della matrice vegetale con n-esano e cloroformio verranno invece cromatografati su colonna di silice e le frazioni ottenute saranno sottoposti ad HPLC, con colonna a fase diretta.d) Caratterizzazione chimica quali-quantitativa dei metaboliti secondari e degli oli essenziali estrattiLa caratterizzazione strutturale dei metaboliti isolati sarà eseguita mediante approfondite analisi spettroscopiche basate su IR, UV, Spettrometria di Massa e Risonanza Magnetica Nucleare usando tecniche 1D e 2D.Per una maggiore completezza appare inoltre opportuno studiare la composizione qualitativa e quantitativa degli oli essenziali contenuti nelle specie vegetali selezionate. E' noto infatti che metaboliti secondari di natura isoprenoide sono attivamente studiati proprio per le loro possibili attività biologiche. Gli oli volatili saranno ottenuti attraverso distillazione delle matrici vegetali in corrente di vapore, idrodistillazione e, quando possibile, estrazione con CO2 supercritica, estrazione assistita da microonde, Head Space (analisi dell'olio essenziale direttamente sulla matrice). L'analisi degli oli sarà effettuata mediante GC e GC/MS. Le analisi GC verranno condotte su un GC con rivelatore FID, l'analisi gas cromatografica accoppiata alla spettrometria di massa (GC/MS) sarà effettuata mediante sistema Agilent e rivelatore Agilent Mass Selective Detector. L'identificazione dei componenti dell'olio sarà stabilita mediante i loro tempi di ritenzione GC, per confronto con quelli riportati in letteratura ed effettuando una co-iniezione con composti puri. I tempi di ritenzione saranno determinati in relazione alla serie omologa di n-alcani e l'identificazione sarà fatta comparando i loro spettri MS con gli archivi informatici e con quelli presenti nella nostra libreria.e) I componenti puri così ottenuti verranno saggiati con gli stessi test utilizzati per gli estratti in toto.f) I prodotti con attività in vitro saranno resi disponibili per studi in vivo.g) Per i metaboliti con migliore attività è prevedibile uno studio chimico farmaceutico al fine di migliorarne le proprietà chimico fisiche e di comprenderne la relazione struttura-attività.G D'Arena, F D'Auria, V Simeon, L Laurenti, S Deaglio, G Mansueto, M I Del Principe, T Statuto, G Pietrantuono, R Guariglia, I Innocenti, M C Martorelli, O Villani, V De Feo, G Del Poeta, P Musto 2012. Am J Hemathol 87:628-31R Di Novella, N Di Novella, L De Martino, E Mancini, V De Feo* 2013 J Ethnopharmacol 145:328-342I Imran, L Hussain, M Zia-ul-Haq, K H Janbaz, A H Gilani, V De Feo* 2011. J Ethnopharmacol 138:676-82KH Janbaz, M Nisa, F Saqib, I Imran, M Zia-Ul-Haq, V De Feo* 2013. J Physiol Pharmacol 64:479-484 I Camele, L Altieri, L De Martino, V De Feo*, E Mancini, GL Rana 2012. Int J Mol Sci 13:2290-00