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ATTIVITÀ DI SOSTANZE DI ORIGINE NATURALE SU CELLULE DI PAZIENTI AFFETTI DA FIBROSI CISTICA

Per i nostri esperimenti utilizzeremo la linea cellulare CFBE41o-, cellule immortalizzate di epitelio polmonare umano isolate da paziente affetto da CF con mutazione D508, e la corrispondente linea cellulare wild type 16HBE14o-.La linea cellulare CFBE41o- conserva alcune caratteristiche delle cellule epiteliali bronchiali umane affette da CF, come la capacità di formare tight junctions funzionali, se coltivate nelle condizioni di coltura standard.Inoltre la linea cellulare è omozigote per Delta F508-CFTR dopo molti passaggi in coltura ed esprime un numero di proteine importanti per l'assorbimento di farmaci a livello polmonare.Per questo motivo la linea cellulare CFBE41o- risulta essere utile per studi sulla malattia a livello cellulare, senza dover necessariamente utilizzare colture primarie. Somministrando le molecole di origine naturale andremo a valutarne l'attività come correttore attraverso analisi biochimiche (western blotting, immunoprecipitazione, immunofluorescenza confocale) per evidenziare una eventuale correzione del traffico della proteina CFTR; inoltre, dal momento che il corretto traffico di CFTR è necessario per la normale organizzazione e per la funzione delle tight junctions (TJ) verranno condotte misurazioni della resistenza elettrica transepiteliale (TEER) per verificare la corretta organizzazione delle TJ, poichè alterazioni delle funzioni di barriera sono causate da ritenzione di Delta F508-CFTR nel reticolo endoplasmatico.Basile A, Pascale M, Franceschelli S, Nieddu E, Mazzei MT, Fossa P, Turco MC, Mazzei M.” Matrine modulates HSC70 levels and rescues DF508-CFTR” J Cell Physiol. 227: 3317-3323 (2012)Persico M, Ramunno A, Maglio V, Franceschelli S, Esposito C, Carotenuto A, Brancaccio D, De Pasquale V, Pavone LM, Varra M, Orteca N, Novellino E, Fattorusso C. “New anticancer agents mimicking protein recognition motifs” J Med Chem. 56 (17): 6666-80 (2013)Rosati A, Bersani S, Tavano F, Dalla Pozza E, De Marco M, Palmieri M, De Laurenzi V, Franco R, Scognamiglio G, Palaia R, Fontana A, di Sebastiano P, Donadelli M, Dando I, Medema JP, Dijk F, Welling L, di Mola FF, Pezzilli R, Turco MC, Scarpa A."Expression of the antiapoptotic protein BAG3 is a feature of pancreatic adenocarcinoma and its overexpression is associated with poorer survival" Am J Pathol. 181(5):1524-9 (2012)Chiappetta G, Basile A, Barbieri A, Falco A, Rosati A, Festa M, Pasquinelli R, Califano D, Palma G, Costanzo R, Barcaroli D, Capunzo M, Franco R, Rocco G, Pascale M, Turco MC, de Laurenzi V, Arra C. “ The anti-apoptotic BAG3 protein is espressed in lung carcinomas and regulates small cell lung carcinoma (SCLC) tumor growth.” Oncotarget 5(16): 6846-53 (2014)Falco A, Rosati A, Festa M, Basile A, De Marco M, d'Avenia M, Pascale M, Dal Piaz F, Tavano F, Di Mola FF, di Sebastiano P, Berloco PB, Nudo F, Caraglia M, Febbraro A, Barcaroli D, Scarpa A, Pezzilli R, De Laurenzi V, Turco MC. “ BAG3 is a novel serum biomarker for pancreatic adenocarcinomas” Am J Gastroenterol. 108(7): 1178-80 (2013)S Montefusco, R Esposito, L D’Andrea, MC Monti, C Dunne, B Dolan, A Tosco, L Marzullo, M Clyne "Copper promotes TFF1-mediated Helicobacter pylori colonization" PlosOne 8 (11) e79455(2013)Bruno AP, De Simone FI, Iorio V, De Marco M, Khalili K, Sariyer IK, Capunzo M, Nori SL, Rosati A."HIV-1 Tat protein induces glial cell autophagy through enhancement of BAG3 protein levels". Cell Cycle.13(23):3640-4(2014)Franco R, Scognamiglio G, Salerno V, Sebastiani A, Cennamo G, Ascierto PA, Botti G, Turco MC, Rosati A. "Expression of the anti-apoptotic protein BAG3 in human melanomas." J Invest Dermatol. 132(1):252-4 (2012)Finetti F, Basile A, Capasso D, Di Gaetano S, Di Stasi R, Pascale M, Turco CM, Ziche M, Morbidelli L, D'Andrea LD. “Functional and pharmacological characterization of a VEGF mimetic peptide on reparative angiogenesis” Biochem Pharmacol. 84:303-11 (2012)