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ORMONI TIROIDEI E TENOCITI: QUALE RUOLO?

MetodiObiettivo 1) Comprendere il meccanismo d’azione degli ormoni tiroidei sui tendini; Identificazione possibili co-recettori. Ci proponiamo pertanto di studiare il ruolo degli ormoni tiroidei nei tendini e nei tenociti derivati sia da individui normali che quelli con patologie tiroidee. Inoltre ci proponiamo di inibire i recettori tiroidei presenti sui tenociti attraverso degli inibitori al fine di indagare su possibili azioni degli ormoni attraverso dei corecettori. Durante tutti questi processi saranno analizzati i profili di espressione genica al momento dell’isolamento dei tenociti e durante il processo di proliferazione Le informazioni ottenute potrebbero fornire dettagli circa i programmi di regolazione genica coinvolti nel processo di generazione dei tendini. sul piano strettamente sperimentale si prepareranno pannelli multipli di cDNA da tessuto tendineo e tenociti isolati da esso, sia normale che da pazienti don patologie della tiroide. E saranno analizzati attraverso microarray, validazione dell’espressione genica mediante Real-Time PCR analisi dei dati di espressione dei mRNAs.Obiettivo 2) Caratterizzare morfologicamente, fenotipicamente e funzionalmente i tenociti dopo e durante stimolazione con gli ormoni tiroidei. Abbiamo dimostrato che gli ormoni tiroidei stimolano la proliferazione dei tenociti isolati da individui sia normali che con patologie tiroidee. Vogliamo analizzare possibili cambiamenti durante tutto il periodo in cui le cellule sono in presenza e assenza degli ormoni tiroidei dopo 12-24-48-78- ore e/o anche piu giorni. Studieremo la morfologia e il fenotipo attraverso saggi di imunoistochimica e utilizzando la citofluorimetria a flusso per la valutazione dell’espressione di marcatori specifici dei tenociti, nei vari gradi di maturazione ( collagene I,IV,V tenscina decorina…) e attraverso analisi di marcatori specifici molecolari. Estrazione di mRNA e valutazione dei marcatori attraverso RT-PCR. La funzione dei tenociti sarà valutata mediante saggi in vitro attraverso produzione di collagene e produzione di fattori di crescita sul sovranatante delle colture in vitro.Obiettivo 3) Individuazione della/e proteine coinvolte nel meccanismo d’azione degli ormoni tiroidei: possibile ruolo come trasportatori. Saranno analizzati mediante utilizzo di proteomica i sovranatanti delle cellule coltivate in presenza/assenza degli ormoni tiroidei ed anche le cellule stesse.Obiettivo 4) Caratterizzazione dei geni selettivamente espressi. Durante la presenza o assenza degli ormoni tiroidei esamineremo il profilo di espressione genica dei tenociti dal momento del loro isolamento e durante tutto il periodo in cui sono a proliferare in presenza degli ormoni tiroidei. Le informazioni ottenute potrebbero fornire dettagli circa i programmi di regolazione genica coinvolti durante il processo di poliferazione ed evenutale differenziamento e formazione del tessuto maturo tendineo.Risultati attesiGli studi sul possibile ruolo svolto dagli ormoni tiroidei sul tessuto tendineo e i suoi derivati cellulari: i tenociti potrebbero essere proposti come eccellente strumento conoscitivo per ottimizzare il trattamento clinico di queste patologie, in quanto per la prima volta offrono la possibilità di studiare una loro possibile implicazione nelle rotture dei tendini, tendinopatie e riparazione dei tendini.TrasferibilitàSe l’associazione tra patologia tiroidea e tendini viene confermata potrebbe costituire un ottimo elemento di trasferibilità alla comunità scientifica internazionale che dovrebbe rivedere il trattamento dei pazienti con patologie tendinee associate a quelle tiroidee.