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ALTERATA FLUIDITA' DI MEMBRANA IN SALMONELLA: APPROCCIO INNOVATIVO PER LO SVILUPPO DI UNA NUOVA CLASSE DI VACCINI

L’impiego di ceppi geneticamente modificati di S. Typhimurium rappresenta un’innovativa procedura per produrre una nuova classe di vaccini vivi attenuati, più efficaci e sicuri rispetto ai tradizionali. Tutti i patogeni al momento dell’infezione inducono due set di geni: geni da stress e geni per la virulenza. I prodotti dei geni heat shock, le heat shock proteins sono fondamentali nel processo di adattamento alle condizioni dell’ospite e permettono che vengano espressi i geni della virulenza garantendo la sopravvivenza del patogeno nell’ospite, la colonizzazione e lo sviluppo della malattia. La riduzione o l’abolizione della risposta da stress con perdita della patogenicità (attenuazione) offre il vantaggio di produrre ceppi attenuati di un patogeno senza che questi perdano gli antigeni responsabili della risposta immunitaria. Abbiamo precedentemente dimostrato in S. Typhimurium che la modifica genetica dello stato fisico della membrana (MPS) altera la risposta heat shock e rende incapace la Salmonella di crescere nei macrofagi in vitro. L’esecuzione di esperimenti in vivo risulta indispensabile per validare le osservazioni in vitro e quindi dimostrare che tali ceppi attenuati, in un modello murino di infezione, non uccidono nè causano malattia nel topo che risulterà protetto quando verrà successivamente inoculato con il ceppo wild-type. La scelta di tale modello è inevitabile per poter valutare la risposta immunitaria dell’ospite e conseguente immunizzazione.Ceppi attenuati di Salmonella, ottenuti nel nostro laboratorio saranno iniettati a topi C57BL/6, che verranno sacrificati a differenti tempi dopo l’inoculo. Milza e fegato verranno prelevati sterilmente in parte omogenizzati e piastrati ad opportune diluizioni su piastre LB agar per la conta delle colonie dopo un’incubazione O/N a 37ºC, e in parte fissati in mezzo OCT e tagliate tramite criostato per analisi immuno-istologiche. L’infiltrazione di cellule del sistema immunitario, quali cellule dendritiche, macrofagi, cellule T e B, sarà evidenziata attraverso metodi di immuno-istochimica, immuno-fluorescenza o mediante analisi FACS. Negli stessi tessuti e nel siero saranno misurate mediante ELISA anche i livelli di citochine sia pro- che anti-infiammatorie. Inoltre, saranno misurati i livelli di immunoglobuline nel siero degli animali immunizzati.Gruppi di topi immunizzati con ceppi di Salmonella attenuati riceveranno, dopo 40 giorni dall’immunizzazione, Salmonella wt. Tali topi verranno monitorati giornalmente valutandone la sopravvivenza. Lavori selezionati nel quadriennio 2009-2012:G.La Regina, R. Bai, W. Rensen, et.al (2011). Design and Synthesis of 2-Heterocyclyl-3-arylthio-1H-indoles as Potent Tubulin Polymerization and Cell Growth Inhibitors with Improved Metabolic Stability. JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY. Vol. 54. Pag.8394-8406 ISSN:0022-2623I. Gomez-Monterrey, P. Campiglia, C. Aquino, et.al (2011). Design, Synthesis, and Cytotoxic Evaluation of Acyl Derivatives of 3-Aminonaphtho[2,3-b]thiophene-4,9-dione, a Quinone-Based System. JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY. Vol. 54. Pag.4077-4091 ISSN:0022-2623I. Gomez-Monterrey , A. Bertamino, A. Porta, et.al (2010). Identification of the Spiro(oxindole-3,3 '-thiazolidine)-Based Derivatives as Potential p53 Activity Modulators. JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY. Vol. 53. Pag.8319-8329 ISSN:0022-2623Gomez-Monterrey, I, Campiglia, P., Bertamino, A., et.al (2010). A novel quinone-based derivative (DTNQ-Pro) induces apoptotic death via modulation of heat shock protein expression in Caco-2 cells. BRITISH JOURNAL OF PHARMACOLOGY. Vol. 160. Pag.931-940 ISSN:0007-1188G. LA REGINA, T. SARKAR, R. BAI, et.al(2009). New Arylthioindoles and Related Bioisosteres at the Sulfur Bridging Group. 4. Synthesis, Tubulin Polymerization and Cell Growth Inhibition, and Molecular Modeling Studies.. JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY. Vol. 52. Pag.7512-7527 ISSN:0022-2623