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RUOLO DELL¿ANNESSINA A1 NELL¿ACQUISIZIONE DELLA CHEMIORESISTENZA IN LINEE CELLULARI DI CARCINOMA PROSTATICO UMANO.

Le linee cellulari utilizzate saranno: le DU145 (cellule di carcinoma prostatico umano, ormone-indipendente) e le DU145R80 (clone delle DU145 resistente allo zoledronato). Esse sono rispettivamente linea parentale e clone resistente all’acido zoledronico iper-esprimente ANXA1 e presentanti un fenotipo mesenchimale molto aggressivo.Con esse saranno creati modelli in vitro, trasfettati con: siRNA down-modulanti l’ANXA1 e plasmidi iper-esprimenti l’ANXA1. Su questi modelli sarà fatta l’analisi dell’espressione e localizzazione dell’ANXA1, mediante Western blotting e immunofluorescenza. Allo scopo di indagare specifici processi cellulari quali la migrazione, saranno effettuati saggi di Wound Healing mediante l’utilizzo della microscopia TIME LAPSE, di invasione attraverso la camera di Boyden e/o saggi di formazione e invasione di sferoidi in vitro. Al fine di dimostrare l’interazione dell’ANXA1 con i recettori per i formil-peptidi (FPR), nei processi di migrazione e invasione cellulare, saranno innanzitutto eseguite analisi per citofluorimetria e Western blotting, per valutare l’espressione di FPR 1, 2, e 3. Sarà verificata la EMT attraverso la valutazione della transizione citosol-nucleo della B-catenina, l’aumento dell’espressione della vimentina, come marker mesenchimale, e la diminuzione della E-caderina, un marker epiteliale, sia per Western blotting sia per immunofluorescenza. Altri studi saranno volti all’identificazione di cellule staminali tumorali (CSC) dalle linee cellulari in coltura, mediante marcatori molecolari di staminalità tumorale, quali CD133, CD24, CD44, EpCAM. Questa sottopopolazione cellulare sarà, in seguito, isolata mediante l’utilizzo di un cell sorter, e messa in coltura. Anche in questo caso ci focalizzeremo su studi di caratterizzazione e funzionali di ANXA1.1)Belvedere R, Bizzarro V, Popolo A, Dal Piaz F, Vasaturo M, Picardi M, Parente L, and Petrella A*. Role of intracellular and extracellular annexin A1 in migration and invasion of human pancreatic carcinoma cells. BMC Cancer 2014; 14:961. doi:10.1186/1471-2407-14-961. I.F 3.3192)Cotugno R, Basile A, Romano E, Gallotta G, Belisario MA* BAG3 down-modulation sensitizes HPV18+ HeLa cells to PEITC-induced apoptosis and restores p53. Cancer Letters 2014; 354-263–271. doi: 10.1016/j.canlet.2014.08.022. I.F 5.0163)Cotugno R, Gallotta D, Piaz FD, Apicella I, De Falco S, Rosselli S, Bruno M, Belisario MA* Powerful tumor cell growth-inhibiting activity of a synthetic derivative of atractyligenin: involvement of PI3K/Akt pathway and thioredoxin system. Biochimica Biophysica Acta. 2014; 1840:1135-44. doi: 10.1016/j.bbagen.2013.11.023. I.F 3.8294)Bizzarro V, Fontanella B, Carratù A, Belvedere R, Marfella R, Parente L, Petrella A*. Annexin A1 N-Terminal Derived Peptide Ac2-26 Stimulates Fibroblast Migration in High Glucose Conditions. PLoS One 2012 vol. 7, p. e45639, ISSN: 1932-6203, doi: 10.1371/journal.pone.0045639. I.F 3.5345)Bizzarro V, Belvedere R, Dal Piaz F, Parente L, Petrella A*. Annexin A1 induces skeletal muscle cell migration acting through formyl peptide receptors.. PLoS One 2012 , vol. 7, p. e48246, ISSN: 1932-6203, doi: 10.1371/journal.pone.0048246. I.F 3.5346)Cotugno R, Fortunato R, Santoro A, Braca A, Gallotta D, De Tommasi N, Belisario MA*. The sesquiterpene lactone coronopilin induces tumor cell-selective apoptosis and mitotic catastrophe. Cell Proliferation 2012; 45,:53–65. doi: 10.1111/j.1365-2184.2011.00796.x. I.F 3.2807)Marfella R, Sasso FC, Cacciapuoti F, Portoghese M, Rizzo MR, Siniscalchi M, Carbonara O, Ferraraccio F, Torella M, Petrella A, Balestrieri ML, Stiuso P, Nappi G, Paolisso G. Tight Glycemic Control May Increase Regenerative Potential of Myocardium during Acute Infarction. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 2012; 97:933-942. doi: 10.1210/jc.2011-2037. I.F 6.310