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CARATTERIZZAZIONE DELL'INTERATTOMA DI SOSTANZE NATURALI BIOATTIVE

Il presente progetto di ricerca sarà articolato in quattro “work packges” (WP): WP1: Selezione dei composti bioattivi e costruzione di “small libraries” I di- e triterpeni utilizzati nel presente progetto saranno selezionati sulla base delle loro correlazione strutturale con congeneri citotossici o pro-apoptotici, oppure per l'attività biologica che hanno dimostrato su altri modelli sperimentali. WP2: Studi sull'attività dei composti selezionati su opportuni sistemi cellulari Sarà determinato l'effetto delle sostanze presenti nelle libraries, sui cambiamenti nucleari compatibili con il processo apoptotico di diversi tipi di cellule neoplastiche. WP3: Identificazione del target molecolare dei composti e studi sui complessi farmaco-proteina risultanti. - Proteomica Chimica DARTS: Questo approccio prevede la valutazione, mediante tecnioche di analisi proteomica, delle proteine la cui stabilità termodinamica vari a seguito della possibile interazione con il composto d'interesse. Tali proteine saranno identificate come popssibili target. WP4: Vaidazione dei target - Analisi SPR: I risultati ottenuti con gli esperimenti di proteomica chimica verranno supportati da studi spettroscopici attraverso analisi di risonanza plasmonica di superficie (SPR). I dati ottenuti da questi esperimenti permetteranno di confermare (o meno) la reale interazione tra il composto ed il suo putativo target, e consentiranno di misurare i parametri cinetici e termodinamici di tale interazione in vitro. - Analisi CETSA. Grazie all'uso della tecnica CETSA sarà possiibile verificare l'interazione della molecola d'interesse con il suo putativo target, all'interno delle cellule tumorali, determinando l'IC50 e la cinetica di interazione.