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ATTIVITÀ DI SOSTANZE DI ORIGINE NATURALE SU CELLULE DI PAZIENTI AFFETTI DA FIBROI CISTICA

Per i nostri esperimenti utilizzeremo cloni della linea cellulare A549 (carcinoma polmonare umano) che sovra-esprimono stabilmente la proteina wild type CFTR or DF508; e la linea cellulare -CFTRCFBE41o-, cellule immortalizzate di epitelio polmonare umano isolate da paziente affetto da CF con mutazione D508, e la corrispondente linea cellulare wild type 16HBE14o-. La linea cellulare CFBE41o- conserva alcune caratteristiche delle cellule epiteliali bronchiali umane affette da CF, come la capacità di formare tight junctions funzionali, se coltivate nelle condizioni di coltura standard.Inoltre la linea cellulare è omozigote per Delta F508-CFTR dopo molti passaggi in coltura ed esprime un numero di proteine importanti per l'assorbimento di farmaci a livello polmonare. Per questo motivo la linea cellulare CFBE41o- risulta essere utile per studi sulla malattia a livello cellulare, senza dover necessariamente utilizzare colture primarie. Somministrando le molecole di origine naturale (matrina un alcaloide quinilizidinico, e l'ectoina un osmoprotettore)andremo a valutarne l'attività come correttore attraverso analisi biochimiche (western blotting, immunoprecipitazione, immunofluorescenza confocale) per evidenziare una eventuale correzione del traffico della proteina CFTR; inoltre, dal momento che il corretto traffico di CFTR è necessario per la normale organizzazione e per la funzione delle tight junctions (TJ) verranno condotte misurazioni della resistenza elettrica transepiteliale (TEER) per verificare la corretta organizzazione delle TJ, poichè alterazioni delle funzioni di barriera sono causate da ritenzione di Delta F508-CFTR nel reticolo endoplasmatico. Persico M, Ramunno A, Maglio V, Franceschelli S, Esposito C, Carotenuto A, Brancaccio D, De Pasquale V, Pavone LM, Varra M, Orteca N, Novellino E, Fattorusso C. “New anticancer agents mimicking protein recognition motifs” J Med Chem. 56 (17): 6666-80 (2013) Doxorubicin-Mediated Cardiotoxicity: Role of Mitochondrial Connexin 43. The anti-apoptotic BAG3 protein is expressed in lung carcinomas and regulates small cell lung carcinoma (SCLC) tumor growth. Chiappetta G, Basile A, Barbieri A, Falco A, Rosati A, Festa M, Pasquinelli R, Califano D, Palma G, Costanzo R, Barcaroli D, Capunzo M, Franco R, Rocco G, Pascale M, Turco MC, De Laurenzi V, Arra C. Oncotarget. 2014 Aug 30;5(16):6846-53 BAG3 promotes pancreatic ductal adenocarcinoma growth by activating stromal macrophages. Rosati A, Basile A, D'Auria R, d'Avenia M, De Marco M, Falco A, Festa M, Guerriero L, Iorio V, Parente R, Pascale M, Marzullo L, Franco R, Arra C, Barbieri A, Rea D, Menichini G, Hahne M, Bijlsma M, Barcaroli D, Sala G, di Mola FF, di Sebastiano P, Todoric J, Antonucci L, Corvest V, Jawhari A, Firpo MA, Tuveson DA, Capunzo M, Karin M, De Laurenzi V, Turco MC. Nat Commun. 2015 Nov 2;6:8695. doi: 10.1038/ncomms9695. BAG3 is a novel serum biomarker for pancreatic adenocarcinomas. Falco A, Rosati A, Festa M, Basile A, De Marco M, d'Avenia M, Pascale M, Dal Piaz F, Tavano F, Di Mola FF, di Sebastiano P, Berloco PB, Nudo F, Caraglia M, Febbraro A, Barcaroli D, Scarpa A, Pezzilli R, De Laurenzi V, Turco MC. Am J Gastroenterol. 2013 Jul;108(7):1178-80. doi: 10.1038/ajg.2013.128. Detection of soluble BAG3 and anti-BAG3 antibodies in patients with chronic heart failure. De Marco M, Falco A, Basile A, Rosati A, Festa M, d'Avenia M, Pascale M, Dal Piaz F, Bisogni R, Barcaroli D, Coppola G, Piscione F, Gigantino A, Citro R, De Rosa R, Vitulano G, Virtuoso N, Manganelli F, Palermo E, Siano F, Rosato G, Hahne M, Tiberti C, De Laurenzi V, Turco MC. Cell Death Dis. 2013 Feb 14;4:e495. doi: 10.1038/cddis.2013.8.