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STUDIO DELLA TOSSICITA' DELL'INQUINANTE AMBIENTALE NONILFENOLO IN MODELLI CELLULARI UMANI

Con la presente ricerca intendiamo evidenziare gli effetti tossici del nonilfenolo in due linee cellulari umane, le cellule Caco-2, cellule di adenocarcinoma intestinale, e le cellule HEPG2, cellule di epatocarcinoma, allo scopo di valutare i potenziali effetti dannosi del nonilfenolo sull'apparato gastroenterico.Lo svolgimento della ricerca prevederà sia studi sperimentali che computazionali.In primo luogo, verrà valutata la vitalità cellulare in presenza di nonilfenolo a diverse concentrazioni e a diversi tempi di trattamento. Si impiegheranno tecniche classiche, come la conta cellulare mediante emocitometro, o saggi di vitalità come il saggio di esclusione del Trypan blue, o il saggio di funzionalità mitocondriale definito saggio MTT. Dal momento che in letteratura è riportato che il nonilfenolo interferisce con la progressione delle cellule nel ciclo cellulare (Manente et al. Cell Prolif 2011), si valuterà la capacità del nonilfenolo, sempre a diverse concentrazioni e diversi tempi, di interferire con l'incorporazione nei nuclei di bromodeossiuridina, chiaro indice di un'interferenza nella capacità delle cellule di entrare nella fase S e quindi di proliferare. Si valuterà anche la capacità del nonilfenolo di interferire con il signalling indotto da fattori di crescita come l'EGF, andando a valutare biochimicamente l'attivazione degli effettori intracellulari dell'EGF. Si valuterà inoltre la capacità del nonilfenolo di indurre morte per apoptosi, essendo la morte cellulare programmata uno dei tipici effetti descritti per il nonilfenolo in altri modelli cellulari (Gong et al. Toxicol Lett 2009). Lo studio dell'apoptosi si avvarrà di tecniche di microscopia ottica o a fluorescenza e di saggi biochimici rivolti alla determinazione dell'attività di alcuni effettori dell'apoptosi, come le caspasi.Mediante l'approccio biocomputazionale, infine, saranno valutate le interazioni a livello molecolare che il nonilfenolo ha con possibili bersagli proteici individuati tramite tecniche di predizione computazionale. Applicando tecniche quali il docking e/o la dinamica molecolare, sarà possibile sia approfondire la conoscenza degli effetti del nonilfenolo su i suoi target molecolari, sia ipotizzare, in congiunzione con le altre informazioni ottenute nel corso del progetto, i pathways metabolici che vengono alterati nei modelli cellulari utilizzati.