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VALUTAZIONE EX VIVO DELLA POTENZA DI DIFFERENTI FARMACI ANTI TNF ALFA SU ESPIANTI DI MUCOSA DA PAZIENTI CON INFIAMMAZIONE CRONICA INTESTINALE

Nei laboratori del Dipartimento di Medicina e Chirurgia presso il campus di Baronissi Salerno è già possibile lo studio delle reazioni immunitarie che coinvolgono la mucosa intestinale nei suoi varii segmenti digiuno, ileo, colon. In particolare abbiamo attivato ed utilizziamo routinariamente un modello sperimentale di cultura di espianti di mucosa prelevati durante esame endpscopico. Questa tecnica ha consentito di delineare specifiche reazioni a specifici trigger come glutine per celiachia e lipopolissaccaride batterico per le MICI. MUCOSA: In breve, si prelevano biopsie intestinali, si pongono in coltura in laboratorio, si espongono alcuni frammenti ad agenti noti ( per le MICI è l'estratto dal liposaccaride batterico - LPS) per scatenare la reazione immunologica in quello specifico segmento intestinale. La figura schematizza il modello sperimentale $IMM_PER_0001 Concluso il tempo di esposizione le biopsie vengono congelate a -80°C fino all'utilizzo. Su fettine tagliateal criostato si valuta l’espressione dei marcatori dell’infiammazione ( ICAM 1, TG2, COX2) con tecniche di immunofluorescenza e si prepara il tessuto ad PCR per l’espressione genica o per western blot per misurare il livello di espressione di alcune proteine generate durante l’infiammazione (in questo studio NFKB e le metalloproteinasi). In questo sistema l'aggiunta di fattori che riducono la risposta infiammatori, come i farmaci biologici, dovrebbe produrre la modulazione di questi marcatori. Abbiamo intenzione di testare l'efficacia dell'infliximab, l'adalimumab, il golimumab e il vedolizumab. SOPRANATANTE: Inoltre, sarà possibile valutare il livello di produzione di alcune citochine pro ed anti infimmatorie nel sopranatante della cultura stessa prima e dopo trigger, ed anche prima e dopo pretrattamento con farmaco biologico. In particolare, doseremo nel sopranante il TGFbeta e la IL15. Gli aspetti originali ed innovativi di questo progetto sono: 1. l'utilizzodi materiale umano in una condizione sperimentale molto vicina alla realtà 2.la possibilità di studiare l'effetto sulla mucosa di uno stesso soggetto, in un preciso momento della sua vita di malattia, di diversi farmaci biologici per capire quale sia più efficace