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SISTEMA ENDOCANNABINOIDE E PATHWAY DEL MEVALONATO NELLA PROGRESSIONE NEOPLASTICA E NELLA RISPOSTA IMMUNE ANTITUMORALE

Il progetto si prefigge di completare lo studio degli effetti di ECs e derivati dell'i6A nella progressione neoplastica e nella risposta immune antitumorale. Le precedenti tappe hanno consentito di collezionare tumori primari di glioblastoma multiforme a diverso grado provenienti da pazienti sottoposti a resezione chirurgica presso il Servizio di Neurochirurgia (dir. Prof. Catapano) dell'Ospedale "G. Rummo" di Benevento. Si è già proceduto all'allestimento di colture primarie nelle quali verranno valutati il tasso proliferativo, l'espressione di fattori neoangiogenetici, di metastatizzazione, di transizione epitelio-mesenchimale e di staminalità, in seguito al trattamento con ECs, con i6A o con solo veicolo. Gli esperimenti saranno condotti mediante citometria a flusso ed Immunofluorescenza. Negli stessi campioni, tessuti neoplastici e linee primarie da essi ottenuti, saranno valutate l'espressione dei recettori CB1 e CB2, la modulazione delle vie di trasduzione del segnale ECs-mediate, l'espressione e l'attività dell'enzima FPPS, l'espressione di recettori in grado di attivare la risposta allogenica NK-mediata (e.g. MICA/B, ULBPs). Antagonisti CB1 ed i6A inibiscono la crescita neoplastica in xenograft allestiti con inoculo s.c. di HCT e DLD1 (CRC cell lines). In questa fase dello studio si valuterà in vivo, negli stessi modelli, l'efficacia di un analogo sintetico dell'i6A (CM223), somministrato per via s.c. peritumorale. I lisati cellulari ottenuti dalle neoplasie escisse saranno testati mediante Proteome Profiler Antibody Arrays (R&D System) per l'analisi del proteoma ed utilizzate per valutare modificazioni epigenetiche mediante Abcam EpiSeeker technology ed analisi di ChIP su geni target specifici. Nei tumori escissi si procederà inoltre a valutare la percentuale di cellule staminali tumorali purificate mediante selezione positiva (Milteny technologies).Ciaglia E, Pisanti S, Picardi P, Laezza C, Sosa S, Tubaro A, Vitale M, Gazzerro P, Malfitano AM, Bifulco M. N6-isopentenyladenosine affects cytotoxic activity and cytokines production by IL-2 activated NK cells and exerts topical anti-inflammatory activity in mice. Pharmacol Res. 2014, 89:1-10. doi: 10.1016/j.phrs.2014.07.003Pisanti S, Picardi P, Ciaglia E, Margarucci L, Ronca R, Giacomini A, Malfitano AM, Casapullo A, Laezza C, Gazzerro P, Bifulco M. Antiangiogenic effects of N6-isopentenyladenosine, an endogenous isoprenoid end product, mediated by AMPK activation. FASEB J. 2014; 28(3):1132-44. doi: 10.1096/fj.13-238238Ciaglia E, Pisanti S, Picardi P, Laezza C, Malfitano AM, D'Alessandro A, Gazzerro P, Vitale M, Carbone E, Bifulco M. N6-isopentenyladenosine, an endogenous isoprenoid end product, directly affects cytotoxic and regulatory functions of human NK cells through FDPS modulation. J Leukoc Biol. 2013; 94(6):1207-19. doi: 10.1189/jlb.0413190Malfitano AM, Laezza C, Saccomanni G, Tuccinardi T, Manera C, Martinelli A, Ciaglia E, Pisanti S, Vitale M, Gazzerro P, Bifulco M. Immune-modulation and properties of absorption and blood brain barrier permeability of 1,8-naphthyridine derivatives. J Neuroimmune Pharmacol. 2013; 8(5):1077-86. doi: 10.1007/s11481-013-9494-0Proto MC, Gazzerro P, Di Croce L, Santoro A, Malfitano AM, Pisanti S, Laezza C, Bifulco M. Interaction of endocannabinoid system and steroid hormones in the control of colon cancer cell growth. J Cell Physiol. 2012; 227(1):250-8. doi: 10.1002/jcp.22727Laezza C, D'Alessandro A, Paladino S, Maria Malfitano A, Chiara Proto M, Gazzerro P, Pisanti S, Santoro A, Ciaglia E, Bifulco M. Anandamide inhibits the Wnt/β-catenin signalling pathway in human breast cancer MDA MB 231 cells. Eur J Cancer. 2012; 48(16):3112-22. doi: 10.1016/j.ejca.2012.02.062Malfitano AM, Laezza C, Galgani M, Matarese G, D'Alessandro A, Gazzerro P, Bifulco M. The CB1 receptor antagonist rimonabant controls cell viability and ascitic tumour growth in mice. Pharmacol Res. 2012; 65(3):365-71. doi: 10.1016/j.phrs.2011.11.008