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MECCANISMI DI INVECCHIAMENTO POLMONARE NEI PAZIENTI CON BRONCOPNEUMOPATIA CRONICA OSTRUTTIVA

Al fine di identificare il ruolo delle sirtuine, ed in particolare di Sirt1, nei meccanismi che aumentano il rischio di sviluppo di enfisema nei pazienti con BPCO, saranno esaminati pazienti affetti da BPCO con prevalente componente enfisematica e prevalente componente bronchitica. Saranno inoltre esaminati soggetti sani non fumatori e fumatori. Nel siero dei soggetti selezionati saranno misurati la Sirt1 ed altre sirtuine (Sirt3 e Sirt6). Nel contempo saranno misurati i livelli delle sostanze infiammatorie e di stress ossidativo target dell'azione sirtuinica, coinvolte nella patogenesi della BPCO. Infine, i dati molecolari saranno correlati sia ai parametri funzionali respiratori che ai parametri clinico/radiologici. Questa ricerca potrà fornire utili informazioni nella identificazione di nuovi biomarcatori di progressione di malattia, che associati e correlati ad altri parametri attualmente disponibili (di natura clinica e strumentale), permetterà di combinare i dati derivanti dalla valutazione molecolare e funzionale. Per l'esecuzione del progetto saranno arruolati pazienti con diagnosi di BPCO in condizioni di stabilità clinica. Al fine di valutare il grado di tolleranza all'esercizio fisico i pazienti saranno sottoposti al test del cammino dei sei minuti (6MWT). Per quantificare l'impatto dei sintomi di BPCO sullo stato di salute dei pazienti sarà utilizzato il questionario CAT (COPD assessment test) mentre per valutare la disabilità respiratoria dei pazienti sarà ulilizzata la scala di dispnea del MRC (medical research council). I pazenti con BPCO saranno divisi in 1) pazienti con prevalente bronchite e 2) pazienti con prevalente enfisema. Per l'identificazione dei biomarcatori e dei target terapeutici nei sieri isolati dai pazienti saranno determinati i livelli di biomarcatori prognostici di BPCO tra cui, la proteina C reattiva (CRP), fibrinogeno ed il peptide natriuretico tipo B (BNP). Quindi saranno valutati i livelli sierici di espressione proteica di Sirt1, Sirt3 e Sirt6. Inoltre, saranno determinati l'espressione (mRNA e proteica)ed il profilo di attività dei target di Sirt1 coinvolti nelle risposte allo stress ossidativo, nei processi infiammatori e di disfunzione endoteliale, tutti processi correlati fra di loro e presenti nei pazienti con BPCO. Per quanto concerne lo stress ossidativo, sarà stimata l'entità di danno ossidativo sulle membrane, sul DNA e sulle proteine, misurando i corrispettivi markers ossidativi. Per misurare la capacità del sistema antiossidante, saranno misurati l'mRNA, l'espressione proteica ed i livelli di attività di enzimi antiossidanti quali la superossidodismutasi SOD1-3), la catalasi (Cat) e la glutatione perossidasi (GPx). Per valutare la disfunzione endoteliale, saranno misurati la biodisponibilità di ossido nitrico (NO)e l'espressione e l'attività della NO sintetasi endoteliale (eNOS). Infine, per quanto concerne l'infiammazione, sarà misurata l'attività del fattore nucleare kappa B (NF-kB)ed attraverso una determinazione citochinica multiplex saranno misurati nei sieri dei pazienti i livelli di IL-1beta, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12, IL-13, IFN e TNF. Infine i dati clinici e funzionali saranno correlati ai risultati molecolari.